Microbiología aplicada: Recuperación de un suelo contaminado por petróleo

MÉTODOS

A continuación se describen los pasos a seguir en la toma de muestras de suelo, en su homogenización, en la preparación de diluciones seriadas, en la medida de la actividad microbiana por espectrofotometría, en la siembra en placa ( masa  y en superficie), en el recuento por el número más probable de microorganismos que crecen sobre crudo de petróleo, o una mezcla artificial de PAH´s , o n-hexadecano  como única fuente de carbono.

TOMA DE MUESTRAS

1- En cada punto de muestreo se remueve la parte superficial del suelo mediante arado (unos 5 m²).

2- De cada punto de muestreo se toman (con un toma muestras, higienizado con etanol) 17 submuestras a 20 cm de profundidad.

3- Todo el suelo de cada punto se reune en unas bandejas (higienizadas con etanol), y se homogeniza

4- Se toman 500 g  de cada punto En frascos estériles de vidrio topacio se introducen 500 g del suelo homogeneizado de cada punto de muestreo. Esta es la muestra a analizar. Se traslada en frío  laboratorio.

HOMOGENIZACIÓN DEL SUELO

1- El suelo de cada muestra se vuelve a homogenizar y se pulveriza en un mortero higienizado con etanol, rápidamente, protegido de corrientes de aire, entre la llama de dos mecheros.

2- El suelo pulverizado se tamiza (sobre tamiz de luz de malla 2 mm), y veinte gramos de cada muestra se introducen en una bolsa estéril de plástico.

3- Se añaden 200 ml de tampón fosfato 60 mM, pH 7.5. Cada bolsa se agita en un homogeneizador “Stomaker” durante 15 segundos. Se pasa a matraz de 500ml.