Microbiología aplicada: Recuperación de un suelo contaminado por petróleo

II.7 RECUENTOS POR EL NÚMERO MÁS PROBABLE

Microorganismos degradadores de hidrocarburos totales

1- Se pesan 0,674g de petróleo (Video) y se disuelven en 67ml de pentano (Video). Se esteriliza por filtración (Video) , con filtros millipore de 0,22 μm de diámetro de poro

2- Añadir 10µl por pocillo de la solución de sustrato(la mezcla anterior). Dejar evaporar el disolvente (pentano).

3- A continuación se añaden 180µl (Video) por pocillo de medio de cultivo (Bushnell-Haas).

4- Y por último se inoculan 20µl por pocillo de cada dilución.

5-Se Incuba a temperatura ambiente durante 2 semanas en oscuridad.

Resultados

Para la lectura de resultados se añade a cada pocillo 50µl de una solución esterilizada por filtración de INT (3g/l) y se incuba durante una noche a temperatura ambiente. Serán positivos aquellos pocillos en los que aparezca un precipitado rojo.

B. Microorganismos degradadores de PAH´s

1- Añadir 10µl de sustrato (mezcla de PAHs en pentano) esterilizado por filtración, a cada pocillo de las placas microtiter. Esperar a que evapore el disolvente. 

2- Añadir el medio de cultivo (Bushnell-Haas).;  180µl por pocillo (video)

3- Inocular los pocillos (20µl por pocillo de cada dilución).

4-Incubar a temperatura ambiente durante 3 semanas en oscuridad.

Resultados

Serán positivos aquellos pocillos en los que aparezca un precipitado amarillo ó amarillo-anaranjado.

C. Microorganismos degradadores de n-hexadecano

1- Se añaden 180µl por pocillo de medio de cultivo (Bushnell-Haas).

2- Añadir 5µl de sustrato (n-hexadecano) esterilizado por filtración.

3-Inocular (20µl por pocillo de cada dilución).

Resultados

Incubar a temperatura ambiente durante 2 semanas en oscuridad.

Para la lectura de resultados se añade a cada pocillo 50µl de una solución esterilizada por filtración de INT (3g/l) y se incuba durante una noche a temperatura ambiente. Serán positivos aquellos pocillos en los que aparezca un precipitado rojo.