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Determinación de Etanol en Sangre Total (Alcoholemia). Cromatografía de Gases



 Introducción



 Fundamento



 Metódica

 

   Reactivos y Material

 

   Procedimiento

 

   Video Completo



 Cuestiones y Cálculos

PROCEDIMIENTO:

1. Preparación de la curva patrón  
  1. Contenido en los matraces:
    Matraz 1 (Estándar 1 o S-1; 0.474g/l): adicionar 60 µl de etanol absoluto y enrasar hasta 100 ml con agua destilada
    Matraz 2 (Estándar 2 o S-2; 0.987 g/l): adicionar 125 µl de etanol absoluto y enrasar hasta 100 ml con agua destilada
    Matraz 3 (Estándar 3 o S-3; 1.975 g/l): adicionar 250 µl de etanol absoluto y enrasar hasta 100 ml con agua destilada
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  2. Transferir desde dichos matraces a cada uno de los viales (anotados como S-1, S-2 y S-3), 0.5 ml de los matraces S-1, S-2 y S-3, respectivamente.   
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  3. Además, pondremos un vial, que actuará como blanco (B), en el que solo se introducirán 0.5 ml de agua destilada.

  4. Agregar a los 4 viales (B, S-1, S-2 y S-3) 100 µl de n-propanol.  
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  5. Cerrar el vial y agitarlo.  VER FOTOS--VER SECUENCIA

  6. Colocar en el inyector automático del cromatógrafo de gases a una temperatura de 60 ºC.

  7. Transcurridos 30 minutos de preincubación, proceder a su inyección.

2. Preparación de las muestras problema
  1. Transferir 0.5 ml de sangre, suero u orina (según la muestra disponible) a los viales. Cada muestra se analizará por duplicado.   VER FOTOS-- VER SECUENCIA

  2. Agregar a cada uno de los viales 100 µl de n-propanol   VER SECUENCIA

  3. Cerrar los viales y agitarlor.   VER FOTOS-- VER SECUENCIA

  4. Colocarlos en el inyector automático del cromatógrafo de gases a una temperatura de 60 ºC.   VER SECUENCIA

  5. Transcurridos 30 minutos de preincubación, proceder a su inyección.   


3. Condiciones Instrumentales
  1. Tiempo de inyección: 5 s   

  2. Presurización: 4 minutos   

  3. Tipo de columna: Carbowax   

  4. Temperatura del horno: 100 ºC   

  5. Temperatura del inyector: 200 ºC   

  6. Temperatura del detector: 250 ºC   

  7. Gas portador: Nitrógeno (30 ml/min)   

  8. Detector: Ionización de Llama (FID)   


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