MICROBIOLOGIA APLICADA: Micologia Clinica MICROCULTIVO DE HONGOS |
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Materiales: |
Materiales: Placa de petri ; portaobjetos; cubreobjetos; doblar una barra de vidrio ( V de vidrio); pinzas de disección; lanceta de siembra; agua destilada; placas con medio de cultivo (Saboureaud glucosa o Saboureaud cloranfenicol o un medio morfológico adecuado) | |
Construcción de la V de vidrio |
1.- Fabricación de la V de vidrio |  |
| 1.1 -Cortar una varilla de vidrio de longitud algo inferior al diámetro de la placa de petri |  |
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| 1.2 - Calentar la parte central de la varilla con la llama del mechero Bunsen |  |
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| 1.3 - Doblar en forma de V |  |
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Esterilización |
2 -Esterilizar en el autoclave el material (portaobjetos, cubreobjetos, V de vidrio, agua destilada y medio de cultivo) |  |
Cultivo: |
3 – Cultivo: 3.1 -Introducir la barra de vidrio en la placa |  |
| 3.2 -Colocar el portaobjetos sobre la barra de vidrio |  |
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| 3.3 -Recortar un cuadradito de medio de cultivo(superficie = ¼ de la del cubreobjetos). Colocarlo sobre el portaobjetos. Ver Video |  |
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| 3.4 –Tomar un fragmento de micelio e inocular en los cuatro lados del medio de cultivo. Ver Video |  |
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| 3.5 -Colocar el cubreobjetos sobre el medio de cultivo inoculado. Ver Video |  |
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| 3.6 -Añadir el agua destilada esteril en la placa.Ver Video |  |
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| 3.7 -Cerrar la placa y sellar con parafilm e incubar 7 dias a 25ºC. |  |
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Observación |
4 .1- Colocar una gota de lactofenol sobre un portaobjetos limpio |  |
| 4.2 - Flamear las pinzas |  |
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| 4.3 -Retirar el cubreobjetos |  |
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| 4.4 - Colocar el cubreobjetos sobre el portaobjetos y esperar unos instantes para que actúe el lactofenol |  |
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| 4.5 -Observar al microscopio con el objetivo “seco fuerte” (x40) |  |
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Localizar estructuras características del hongo (conidioforos, esporangios,...) |  |