Sangre

Hemoglobina
Hemoglobina: teoría

La hemoglobina se halla en el interior de los glóbulos rojos, salvo en determinadas patologías en que puede aparecer hemoglobina en plasma (hemoglobinemia), por ej. infecciones graves, ciertas intoxicaciones, etc.

 Generalmente un aumento de los valores de hemoglobina por encima de los normales es tan solo aparente. Suele ser debido a un aumento del número de hematíes, por ejemplo en la adaptación a un cambio de altitud, o bien en los casos en que la sangre sufre una concentración por pérdida de líquido plasmático (por ejemplo, al sufrir el cólera). 

Un descenso en los valores de hemoglobina por debajo de los normales es, sin embargo, muy común y un síntoma característico de las anemias, hemorragias repetidas y leucemia.

Fundamento: Consiste en hacer reaccionar la sangre con un reactivo que contiene cianuro y ferrocianuro potásico (reactivo de Drabkins), que oxida la hemoglobina a metahemoglobina la cual a su vez pasa a cianometahemoglobina. La intensidad de color de este compuesto se mide fotocolorimétricamente. Los resultados se llevan a una curva estándar realizada con soluciones de cianometahemoglobina comercial, de donde se extrapolan las concentraciones de hemoglobina de las muestras problema.

Procedimiento:

1.- Desinfectar la yema del dedo con alcohol, secándola posteriormente con algodón. Utilizar siempre guantes y lancetas estériles.

2.- Punzar la yema del dedo con la lanceta y presionar el mismo para que salga sangre.

3.- Se obtiene la sangre por punción capilar, de la que se toman directamente 0,02 ml con una pipeta de hemoglobina.

4.- Se llevan los 20 µl de sangre a un tubo de ensayo que contiene 5ml de reactivo Drabkins. Agitar por inversión varias veces y dejarlo reposar durante 10 minutos.
6.- Ajustar el fotocolorímetro a 540nm en absorbancias y presionar "auto cero", para que las absorbancias marquen "0.000".
7.- Posteriormente ajustando el 100 por ciento de transmisión con otro tubo de ensayo que solo contenga 5ml de reactivo Drabkins (tubo de la derecha de la foto adjunta)..

8.- Construcción de la curva a estándar.-    De un estándar comercial de cianometahemoglobina (que contiene 20g/100ml) tomar 1, 2, 3, 4 y 5 ml y ponerlos respectivamente en 5 tubos de ensayo. Añadir a cada tubo reactivo de Drabkins hasta completar un volumen total de 5ml. Los tubos estándar así preparados representan 4, 8, 12, 16 y 20g de hemoglobina/100ml de sangre respectivamente. Se leen a 540 nm frente a un tubo que solo contenga reactivo Drabkins. Se construye la curva estándar como se indica en la página siguiente. Esta curva nos servirá mientras estamos utilizando los mismos reactivos.