Detección de la infección viral por los efectos citopáticos

OBTENER EL CULTIVO EN MONOCAPA

1. Obtener el cultivo en monocapa:

1ª) inocular el “shell vial” con una suspensión de células vero.

1b-incubar durante 24 horas  a 37 ^o C.

1c)- Eliminar el medio de cultivo. Añadir 1 ml de medio de cultivo fresco

CULTIVAR EL VIRUS

2a- Cultivar el virus: inocular el cultivo de células con 100 μl de una suspensión de HSV1.

2b- incubar de nuevo durante 24 horas en las mismas condiciones

2c-Eliminar sobrenadante del cultivo

TENIR LAS CÉLULAS

3a-Fijar el cultivo celular con metanol  durante 2-3 minutos. Eliminar el metanol

3b-Teñir con azul de metileno durante dos o tres minutos

3c-Eliminar el exceso de colorante por lavado con agua, con cuidado de no desprender el cultivo

RECUPERAR EL CUBREOBJETOS CON LAS CÉLULAS ADHERIDAS

4-Recuperar las células adheridas al cubreobjetos: Invertir el “shell vial”.

Perforar el extremo del “shell vial” con una aguja hipodermica estéril para permitir que el cultivo se deposite sobre el tapón del “shell vial”.

Recoger el cultivo y depositarlo sobre un portaobjetos

DETECTAR LOS EFECTOS CITOPÁTICOS DEL VIRUS

Observar al microscopio óptico las diferencias entre cultivos no infectados y los infectados con el HSV1. a) las placas de células redondeadas caracterizan la infección por este virus.b ) los núcleos se distorsionan y contienen inclusiones eosinofilicas. c) otras manifestaciones de los efectos citopáticos incluyen la formación de células gigantes, así como sincitios multinucleados (mas comunes con HSV2).

Aspecto de las células vero no infectadas e infectadas con HSV1 (a la derecha)