Detección de bacterias de significado especial en alimentos: Staphilococcus
Detección de Staphilococcus
Detección de Staphiloccocus en alimentos
El método comprende el enriquecimiento en caldo Giolitti-Cantoni, el cultivo en medios selectivos (Chapman y Baird-Parquer) y la prueba de la coagulasa para S. aureus
1- Enriqucimiento en caldo Giolitti- Cantoni.
Inocular 1 ml de la dilución 10-1 en 9 ml de caldo. Añadir parafina esteril para crear un ambiente anaerobio. Incubar a 37 º C, 24 horas.
Este medio de cultivo es muy selectivo (inhibe a casi todo los microorganismos acompañantes de Staphilococcus). Piruvato, glicerina y sobre todo altas concentraciones de manitol soportan el crecimiento de Staphilococcus. El LiCl inhibe el crecimiento de las bacterias gram negativas. El telurito inhibe el de las gram positivas acompañantes. La anaerobiosis del cultivo (que provoca la capa de parafina) inhibe el crecimiento de Micrococcus. El crecimiento de Staphilococcus se reconoce por una coloración negra (por la reducción de telurito a teluro metálico por Staphilococcus)
2- Utilizar los cultivos positivos (ennegrecimiento) para inocular con asa el medio selectivo de Baird- Parker Incubar a 37º C 24-48 horas
Agar de Baird-Parker
Es selectivo por su contenido en litio. Permite el crecimiento de varias especies de Staphilococcus incluyendo S. aureus. En ocasiones pueden crecer cepas de Bacillus, Micrococcus o de levaduras.
La yema de huevo da opacidad al medio. La producción de lipasas (lecitinasa) produce un aclaramiento alrededor de la colonia. Si se prolonga la incubación más de 48 horas, pueden formarse precipitados de proteínas. Además de estos cambios, S. aureus forma colonias negras (reducción de telurito a teluro). Frecuentemente la hidrólisis de la yema de huevo y la reducción del telurito suelen asociarse a colonias que producen coagulasa, por lo que se toman como indicadoras de la prueba de la coagulasa característica de S. aureus
Los estafilococos patógenos dan positivas la DNasa, coagulasa y lecitinasa
3- Detectar colonias de Staphylococcus tras 24 y 48 horas de incubación
Prueba de la coagulasa para identificación de Staphylococcus aureus
sA la derecha olución control y coagulación por S. aureus: cuando se inclinan la solución no inoculada forma el menisco típico de un líquido, mientras que el cultivo de una bacteria coagulasa + permanece sólido.
Una muestra de las fosas nasales se cultiva en un medio con alta concentración de NaCl (manitol salado).
Tomar una muestra de las fosas nasales con un escotillón estéril.
Agar de Manitol salado
Sembrar de forma masiva en una placa (ver video) manitol salado
El medio solo permite el crecimiento de los microorganismos capaces de crecer en presencia de concentraciones elevadas de NaCl, La fuente de carbono es manitol. El rojo fenol permite identificar las colonias amarillas como fermentadoras de manitol (S. aureus). Otras especies (como S. epidermidis) no fermentan el manitol (colonias rosa)
Incubar a 37º C 24-48 horas.
Detectar crecimiento masivo
