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Licenciado en
Bioquímica
Plan año 2001
B.O.E. Nº 33 de 7 de febrero de
2001

Primer Curso

Segundo Curso

Información General

(Realizado por:) Facultad de
Ciencias.
Universidad de Granada. 2002.
Última Revisión: 30-Oct-2002 8:41

METODOLOGÍA Y EXPERIMENTACIÓN EN BIOQUÍMICAS
I

PROGRAMA
DE TEORÍA         PROGRAMA
DE
PRÁCTICAS
BIBLIOGRAFÍA

SISTEMA
DE EVALUACIÓN        OBJETIVOS

PROGRAMA  DE TEORÍA

1. PRINCIPIOS
GENERALES DE LA METODOLOGÍA BIOQUÍMICA. Diseño
experimental. Elaboración de un protocolo. Selección de métodos de análisis.
Calidad de los datos. Presentación de los datos.

2. MÉTODOS
GENERALES DE LABORATORIO. Equipamiento
básico de un laboratorio de bioquímica. Material común. Instrumentación.
Manuales de aparatos. Calidad de los reactivos comerciales. Utilización de
catálogos comerciales. Calidad del agua. Preparación de y utilización de
material estéril. Tratamiento de los residuos de laboratorio. Seguridad en el
laboratorio. Preparación de disoluciones. Pesada. Medida y control del pH.
Amortiguadores comunes. Experimentación con órganos o cortes de tejidos.
Experimentación con cultivos celulares. Fragmentación celular. Determinación de
proteínas en disolución. Preparación de muestras para microscopia.

3.
ESPECTROSCOPIA. Espectroscopia
ultravioleta visible (uv/v). Consideraciones generales sobre absorción UV/V y
las transiciones electrónicas asociadas. Grupos cromóforos y espectros UV/V.
Espectrofluorimetria. Espectrometria de resonancia electrónica (ESR).

4. CINETICA
ENZIMATICA. Técnicas
enzimáticas. Unidades enzimáticas y purificación. Técnicas de ensayo enzimático.
Cinética del estado estacionario. Determinación de parámetros cinéticos, km,
kcat. Inhibición enzimática: Efecto del inhibidor sobre los parámetros
cinéticos. Cinética alostérica. Determinación del coeficiente de
Hill.

5.
CENTRIFUGACION. Introducción.
Principios básicos de la sedimentación. Tipos de centrífugas, rotores y su uso.
Centrifugación en gradiente. Centrifugación preparativa. Análisis de las
fracciones subcelulares. Marcadores. Centrifugación analítica. Algunas
aplicaciones.

6.
CROMATOGRAFIA. Fundamentos
teóricos. Cromatografía de adsorción. Cromatografía de reparto. Cromatografía
Gas-líquido (GLC). Cromatografía de intercambio iónico. Cromatografía de
exclusión. Cromatografía de afinidad. Cromatografía de gases. Cromatografía
líquida de alta resolución (HPLC).
7.
ELECTROFORESIS.
Fundamentos generales. Electroforesis en papel. Electroforesis en gel.
Electroforesis nativa y desnaturalizante. Electroforesis en gel de agarosa.
Electroforesis en gel de poliacrilamida. Isoelectroenfoque. Electroforesis
bidimensional.

PROGRAMA
DE PRÁCTICAS

1.    Tratamiento de
datos experimentales.

2.    Estudio
espectroscópico de coenzimas de oxido-reducción.

3.    Preparación de
soluciones amortiguadoras. Determinación de proteínas por métodos colorimétricos
(método Lowry y método Bradford).

4.    Mantenimiento de
cultivos celulares.

5.    Determinación de
los parámetros cinéticos de un enzima.

6.    Aislamiento de
fracciones subcelulares de hígado mediante centrifugación diferencial. Análisis
del grado de pureza mediante cuantificación de enzimas marcadoras.

7.    Separación,
identificación y cuantificación de los esteroides urinarios por Cromatografía
gas-liquido.

8.    Separación
electroforética en gel de poliacrilamida de proteínas.

9.    Separación
electroforética de ácidos nucléicos en gel de agarosa.

BIBLIOGRAFÍA

1.-
“Basic Biochemical Methods”. Alexander, R.R. y Griffiths, M. Ed.
Wiley-Liss. 1993.

2.-
“Modern Experimental Biochemistry”. 2ª ed.   Boyer Rodney F. Ed. The
Benjamin/Cummings Publishing Company. 1993.

3.-
“Enzymology. Labfax”. Engel, P.C. Ed. Academic Press.
1996.

4.- “Técnicas
de Bioquímica y Biología Molecular”. Freifelder, D. Editorial Reverté, S. A.
1991.

5.-
“Tecnología de las Enzimas”. Gacesa, P. y Hubble, J. Editorial Acribia,
S. A. 1990.

6.-
“Electrophoresis. The basics”. Hawcroft, D. M. Ed. IRL Press (Oxford
University). 1997.

7.-
“Analytical Biochemistry”. Second edition. Holme, D.J. & Peck, H. Ed.
Longman Scientific & Technical. 1993.

8.-
“Chomatographie en Phase Liquide. Exercices et Problèmes”. Rosset R.y
Kolodziejczyk, H. Ed. Masson. 1995.

9.-
“Principles and Techniques of Practical Biochemistry”. Fourth Edition.
Wilson, K. y Walker, J. Ed. Cambridge Uiversity Press. 1994.

SISTEMA DE EVALUACIÓN

Para ser
evaluado es imprescindible haber realizado todas las prácticas del
programa.

En
la evaluación por curso se tendrá en cuenta la actitud en el laboratorio,
resultados experimentales, y calificación del examen de final.

El
alumno que no supere dicha evaluación o quiera  mejorar su calificación podrá
presentarse a un examen final de la asignatura.

OBJETIVOS

Aprendizaje y
desarrollo de las principales técnicas utilizadas en el laboratorio de
bioquímica. Adiestrar al alumno en el manejo de la bibliografía específica para
la elaboración de un protocolo destinado a desarrollar un experimento en el
laboratorio.